薄層色譜，或稱薄層層析(thin-layer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行定性與定量分析、分離和鑒定的一種層析分離技術(shù)。20世紀(jì)50年代從經(jīng)典柱色譜法及紙色譜法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種平面色譜技術(shù);至20世紀(jì)60年代后，人們對(duì)薄層色譜法在使用器材的規(guī)格、操作方法及術(shù)語(yǔ)使用的標(biāo)準(zhǔn)化等方面進(jìn)行了大量的工作，使該方法日趨成熟和完善，廣泛地應(yīng)用于有機(jī)合成中。TLC薄層層析技術(shù)作為有機(jī)合成中，最直接的監(jiān)測(cè)反應(yīng)的手段。
原理:色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能的不同，或和其它親和作用性能的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)，進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用，從而將各組份分開。
特點(diǎn):樣品分離量少(微克-毫克級(jí))，分析快速。
分類:按所用固定相材料不同，分為吸附、分配、離子交換、凝膠過(guò)濾等薄層層析。有機(jī)合成中常用的硅膠，氧化鋁薄層屬于吸附色譜。
比移值（Rf）：化合物移動(dòng)的距離大小用Rf值來(lái)表達(dá)。這是一個(gè)位于0-1之間的數(shù)值，它的定義為：化合物最高濃度中心距離原點(diǎn)基線（最先點(diǎn)樣時(shí)已經(jīng)確定）的距離除以溶劑的前沿距離原點(diǎn)基線的距離。
點(diǎn)樣----成功分離的關(guān)鍵
1、點(diǎn)樣原點(diǎn)小而圓，直徑盡量不要超過(guò)2mm（有機(jī)溶劑盡量用0.3mm直徑毛細(xì)管，水等高粘度的溶劑用0.5mm直徑的）;
2、在便于顯色的前提下，點(diǎn)樣量盡量少，防止過(guò)載拖尾或掩蓋Rf相近的點(diǎn);
3、點(diǎn)樣勿傷及薄層表面;
4、點(diǎn)樣原點(diǎn)盡量遠(yuǎn)離薄層邊緣，至少相隔3mm, 減少邊緣效應(yīng)（邊緣經(jīng)常跑歪）;
5、選擇規(guī)則的矩形薄板;
6、所有點(diǎn)樣點(diǎn)要保持在一條與底邊平行的直線上，標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)對(duì)照時(shí)，務(wù)必點(diǎn)交叉點(diǎn)；
7、點(diǎn)樣完后，溶劑用電吹風(fēng)盡量吹干。
展開劑的選擇：化合物在薄板上移動(dòng)距離的多少取決于所選取的溶劑不同。在戊烷和己烷等非極性溶劑中，大多數(shù)極性物質(zhì)不會(huì)移動(dòng)，但是非極性化合物會(huì)在薄板上移動(dòng)一定距離。相反，極性溶劑通常會(huì)將非極性的化合物推到溶劑的前段而將極性化合物推離基線。一個(gè)好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中所有的化合物都離開基線，但并不使所有化合物都到達(dá)溶劑前端，Rf值最好在0.2-0.8之間。雖然這個(gè)條件不一定都能滿足，但這應(yīng)該作為薄層色譜分析的目標(biāo)（在柱色譜中，合適的溶劑應(yīng)該滿足Rf在0.2-0.3之間）。那么，應(yīng)該選取哪些溶劑呢？一些標(biāo)準(zhǔn)溶劑和他們的相對(duì)極性列于如下：
石油醚<正己烷<二氯甲烷<四氫呋喃<乙酸乙酯<丙酮<正丙醇<甲醇<水
常用的混合體系
EA/PE(hexanes)，DCM/MeOH
PE/DCM，PE/Acetone，Ether/DCM，EA/DCM，Acetone/DCM
展開劑的選擇原則
1、對(duì)所需成分有良好的溶解性;
2、可使各成分間有較好的分離；
3、待測(cè)組分的Rf在0.2-0.8之間；
4、不與待測(cè)組分發(fā)生化學(xué)反應(yīng);
5、沸點(diǎn)適中，黏度較小;
6、展開后組分斑點(diǎn)圓且集中;
7、混合溶劑最好新鮮配制。
展開
1、盡量用新配制展開劑(長(zhǎng)時(shí)間揮發(fā)后比例會(huì)改變);
2、展開缸蓋子密封性要好;
3、展開劑用量適中，不能漫過(guò)點(diǎn)樣原點(diǎn);
4、薄層板側(cè)邊不能貼到展開缸壁;
5、薄層板盡量用鑷子夾住小心放入展開缸中，而不是用手捏住放入;
6、讓溶劑向上展開約90%的薄板長(zhǎng)度；
7、理想的展開位置為保證Rf值在0.2-0.8之內(nèi)。
看板：一看、二照、三碘、四顯
1、從展開池中取出薄板并且馬上用鉛筆標(biāo)注出溶劑到達(dá)的前沿位置,根據(jù)這個(gè)計(jì)算Rf的數(shù)值;
2、用鑷子小心取出薄層板，吹干溶劑;
3、首先直接觀察，畫出有色物質(zhì)的斑點(diǎn)位置;
4、在紫外燈下觀察有無(wú)暗斑或熒光斑點(diǎn)（并用鉛筆畫出斑點(diǎn)位置）;
5、大部分有機(jī)物會(huì)吸附碘，可逆的產(chǎn)生棕色或黃色斑點(diǎn);
6、千萬(wàn)注意，等高的點(diǎn)，不一定是同一個(gè)物質(zhì)，有可能是極性相同的點(diǎn)，需要用其他監(jiān)測(cè)方法（如LCMS）確定。
7、用破壞性方式觀測(cè)薄板。當(dāng)化合物沒(méi)有紫外活性的時(shí)候，只能采用這種方法。使用染色劑時(shí)，將干燥的薄板用鑷子夾起并放入染色劑中，確保從基線到溶劑前沿都被浸沒(méi)。用紙巾擦干薄板的背面。將薄板放在加熱板上觀察斑點(diǎn)的變化。在斑點(diǎn)變得可見而且背景顏色未能遮蓋住斑點(diǎn)之前，將薄板從加熱板上取下。
TLC-MS聯(lián)用
用小板點(diǎn)成帶狀，分離少量的樣品，刮取a、b、c三個(gè)純點(diǎn)，MS檢測(cè)出哪個(gè)點(diǎn)可能是我們的產(chǎn)物，取得標(biāo)樣，再展開prep-TLC得到純化后樣品，作NMR鑒定。
TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)機(jī)
對(duì)于不穩(wěn)定的化合物各個(gè)時(shí)機(jī)點(diǎn)最好都要監(jiān)測(cè)。
1、反應(yīng)半小時(shí);
2、反應(yīng)過(guò)夜前后，TLC檢測(cè)并留樣:
3、后處理前后，TLC檢測(cè)并留樣;
4、樣品拌硅膠前后，TLC檢測(cè)并留樣;
5、機(jī)分樣品濃縮凍千前后，TLC檢測(cè)并留樣。
TLC為柱分離尋找條件
1、選擇不同的混合體系, 多次嘗試，如果想讓Rf變得更大一些，可使溶劑體系極性更強(qiáng)些；如果想讓Rf變小，就應(yīng)該使溶劑體系的極性減小些。如果在薄板上點(diǎn)樣變成了條紋狀而不是一個(gè)圓圈狀，那么你的樣品濃度可能太高了。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析，如果還是不能奏效，就應(yīng)該考慮換一種溶劑體系。
2、找到目標(biāo)物Rf值0.2左右，并與其他雜質(zhì)分離度較大的系統(tǒng);
3、然后根據(jù)樣品分離度，硅膠規(guī)格，柱徑比，硅膠與樣品比例等綜合信息，選擇比Rf值0.2左右體系稍小極性的體系進(jìn)行柱層析。
樣品要求：因?yàn)楣枘z板是弱酸性的，對(duì)酸不穩(wěn)定的化合物盡量避免爬大板；對(duì)空氣，水，有機(jī)溶劑穩(wěn)定；低沸點(diǎn)的溶劑里要好溶；最好有紫外吸收；極性不能太大（至少展開劑能爬起來(lái)）。
上樣：盡量少的溶劑溶解樣品，最好是易揮發(fā)的，二氯甲烷最常用，如果不溶可以加幾滴甲醇促溶。可以用一次性滴管塞棉花后剪成毛筆狀上樣，每個(gè)人的辦法都不同，小編就是這么弄的，順便練練毛筆字。上樣時(shí)也最好像寫毛筆字一樣一氣呵成，這樣跑出來(lái)的帶比較均勻。如樣品溶液太多需要上兩遍樣，先用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑后再上樣。
跑板：展開劑的選擇，先用小板爬樣，具體怎么爬小板，選到合適的展開劑后，配好溶劑爬大板，由于大板和小板由細(xì)微的差別，大板展開劑的極性可以稍微比小板展開劑的極性大一點(diǎn)，一樣的話也問(wèn)題不大。跑板最好要跑到快頂端1cm左右，充分展開樣品，切記不要跑過(guò)，跑過(guò)的話，極性小的點(diǎn)可能會(huì)被展開劑沖都一起，而極性大的點(diǎn)雖然不會(huì)沖到上面，但會(huì)變散，不容易判斷色帶的邊緣。
檢測(cè)：產(chǎn)品的判斷，通過(guò)極性大致判斷哪幾個(gè)色帶可能是產(chǎn)品，然后每個(gè)色帶可以先刮一點(diǎn)，碾碎，加甲醇溶解，過(guò)濾送LCMS檢測(cè)判斷。
刮板：判斷好色帶后，在紫外燈下，用鉛筆描好熒光帶，開始刮板。帶好口罩很重要，小編是用美工刀刮的，刮不干凈的可以用小板刮可以刮干凈。
洗脫：刮好的硅膠，量少的話，可以隔著稱量紙用試管搟碎。量多的話，直接裝到自封袋里面隨便蹂躪，直到成粉末為止。粉末狀的硅膠樣品的洗脫，大部分人是直接加溶劑泡出來(lái)。但小編用的是，把硅膠粉直接裝到柱子（有底層砂芯的那種）里，上層鋪一薄薄的石英砂，直接像過(guò)柱子一樣在上層加溶劑壓出來(lái)，這種方法的好處就是，對(duì)于溶解性不好的樣品可以快速洗出，用相對(duì)較少的溶劑洗出產(chǎn)品。加入溶劑洗脫的時(shí)候可以隨時(shí)點(diǎn)板看產(chǎn)品是否已經(jīng)完全洗出。
常見拖尾原因及解決辦法
1、首先考慮的是樣品濃度過(guò)大，薄層板過(guò)載導(dǎo)致。這種情況直接降低樣品濃度或者是上樣量就可以驗(yàn)證了。
2、樣品對(duì)硅膠的吸附能力過(guò)強(qiáng)導(dǎo)致的拖尾。對(duì)不同體系加入不同的調(diào)節(jié)劑，酸體系加冰醋酸或甲酸，堿體系加氨水、三乙胺或二乙胺。
3、展開劑的極性與樣品極性不附，不能做到有效展開導(dǎo)致。可以通過(guò)調(diào)節(jié)展開劑極性解決。
4、如果是長(zhǎng)帶狀，那最可能的原因是展開劑對(duì)樣品的溶解度不夠所導(dǎo)致。可以根據(jù)極性表?yè)Q極性相近的對(duì)樣品溶解度更好的溶劑做展開劑，另外樣品未溶解完全，點(diǎn)在班上的樣品有未溶固體樣品也會(huì)導(dǎo)致長(zhǎng)條狀拖尾。
TLC顯色劑匯總
1、4-甲氧基苯甲醛顯色 (廣譜顯色劑)
原料：1.4-甲氧基苯甲醛 (p-anisaldehyde)13mL；2.醋酸(AcOH) 5mL；3.濃硫酸(conc.H2SO4)18mL；4.乙醇 (EtOH)478mL
調(diào)配方法：把1,2,4在冰浴條件下混合后，緩慢滴加3，冷藏保存
2、磷鉬酸顯色劑 (廣譜顯色劑，特別是含有羥基的化合物)
原料：1.磷鉬酸 (12MoO3.H3PO4) 5g；2.乙醇 (EtOH)100mL
調(diào)配方法：把1,2混合成溶液
注意：需要強(qiáng)熱才能顯色
3、鈰-鉬酸銨顯色，別名：HANESSIAN染色液(廣譜顯色劑)
原料：1.鉬酸銨((NH4)6Mo7O24?4H2O)25g；2.硫酸鈰 (Ce(SO4)2)5g；3.濃硫酸(conc.H2SO4)50mL；4.蒸餾水 (H2O)450mL
調(diào)配方法：把1,2,3,4混合后即可使用
4、硝酸鈰銨(適用于：大分子醇類)
原料：1．1%硝酸鈰銨的0.2mol/L硝酸溶液；2.N,N-二甲基-對(duì)苯二胺鹽酸鹽1.5g溶于甲醇(128ml)、水(25ml)與乙酸(1.5ml)混合液
調(diào)配方法：將(1)與(2)等量混合
噴板后于105℃加熱5min
5、茚三酮顯色 (適用于：胺基化合物)
原料：1. 茚三酮 ((ninhydrin) 0.3g；2.醋酸 (AcOH)3mL；3.正丁醇 (n-BuOH)100mL
調(diào)配方法：把1,2,3混合成溶液即可
小竅門：對(duì)于比較難顯色的胺基化合物，把TLC蘸一下HBr溶液加熱烤一下后再蘸取茚三酮顯色劑
6、二硝基苯肼顯色，簡(jiǎn)稱：DNP顯色 (適用于：醛或酮類)
原料：1.2,4-二硝基苯肼12g；2.濃硫酸(conc.H2SO4)60mL；3.蒸餾水(H2O)80mL；4.乙醇(EtOH)200mL
調(diào)配方法：把1,2,3,4混合成溶液即可
7、堿性高錳酸鉀顯色(廣譜顯色劑，特別是還原性化合物)
原料：1.高錳酸鉀(KMnO4)1.5g ；2.碳酸鉀(K2CO3)10g ；3.氫氧化鈉(NaOH)0.125g；4.蒸餾水(H2O)200mL
調(diào)配方法：把1,2,3,4混合成溶液即可
注意要點(diǎn)：試劑壽命比較短，一般三個(gè)月以內(nèi)就得重新配置
8、硝酸銀/過(guò)氧化氫(適用于：鹵代烴類)
原料：1.硝酸銀0.1g溶于水1ml；2.2-苯氧基乙醇l00ml溶于丙酮200mL；3.30%過(guò)氧化氫1滴
調(diào)配方法：把1,2,3混合成溶液即可
方法：噴后置紫外光下照射
現(xiàn)象：斑點(diǎn)呈暗黑色
9、氯化鐵（適用于：酚類、羥酰胺酸）
原料：1%-5%氯化鐵的0.5mol/L鹽酸溶液
現(xiàn)象：酚類呈藍(lán)色、羥酰胺酸呈紅色
10、溴甲酚綠顯色，簡(jiǎn)稱：BCG顯色 (適用于：羧酸類等含有酸性基團(tuán)的化合物)
原料：1.溴甲酚綠(Bromocresol green)40mg；2.乙醇(EtOH)100mL；3.0.1N氫氧化鈉水溶液適量
調(diào)配方法：把1,2混合后，往里面滴加3直到溶液變成藍(lán)色
11、過(guò)氧化氫（適用于：芳香酸）
原料：0.3%過(guò)氧化氫溶液
使用方法：噴后置紫外光(365nm)下觀察
現(xiàn)象：呈強(qiáng)藍(lán)色熒光
12、DRAGENDORFF試劑顯色(適用于：含氮化合物)
原料：1.次硝酸鉍 (Bismuth subnitrate)1.7g；2.醋酸(AcOH)20mL；3.蒸餾水(H2O)80mL；4.碘化鉀(KI)40g；5.蒸餾水(H2O)100mL
調(diào)配方法：A液: 1+2+3， B液：4+5，A液(5mL)+B液(5mL)+醋酸(20mL)+蒸餾水(70mL)混合配成
13、香草醛顯色(廣譜顯色劑)
原料：1.香草醛((Vanillin)15g；2.濃硫酸(conc.H2SO4)2.5mL；3.乙醇(EtOH)250mL
調(diào)配方法：把1,2,3混合后配成，使用壽命較短
14、碘/硅膠顯色(廣譜顯色劑)
原料：1.碘(I2)適量；2.硅膠(SiO2)適量
調(diào)配方法：把1,2混合在密閉容器中靜置，顯色的時(shí)候直接只需要把TLC放進(jìn)去即可，碘熏后，用水沖一下，可以增強(qiáng)顯色效果，并可以固定住顯色一段時(shí)間
15、紫外燈-UV LAMP(適用于：共軛結(jié)構(gòu)化合物)
16、5%的硫酸乙醇（廣譜顯色劑，尤其是含有羥基等易于氧化的基團(tuán)）
原料：1.98%的濃硫酸1g；2.乙醇19g
調(diào)配方法：將濃硫酸緩慢加入到乙醇中，加入少量無(wú)水硫酸鎂干燥
17、水(適用于：最后的手段！)
在所有的顯色劑都沒(méi)用的情況下，把TLC稍微浸點(diǎn)水后，對(duì)著光看，有可能看到化合物的點(diǎn)(有機(jī)化合物不溶于水)
18、茜素(適用于：硼酸/硼酸酯類化合物)
配制：1M的茜素丙酮溶液
顯色的時(shí)候直接只需要把TLC放進(jìn)去，在366nm紫外燈下觀察有亮黃色熒光點(diǎn)。
茜素----一種高效的硼酸TLC顯色劑
注：TLC板在浸潤(rùn)顯色劑后，不一定能立刻顯色的，有的需要熱烤才能顯色！